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在药物分析研究中如何让自己成为色谱专家2021-07-07 21:02·那兔日记本文来源：药物分析之家导读：在药物研发中药物分析是一项繁杂而细致的工作并且要具有足够的耐心与细心对于分析工作的性质大家看法各不相同在此不一一赘述但这不影响药物分析在药物研发中的关键作用要做好分析工作必须要有深厚的基本功当然大量的分析实验经验也是不可缺少的今天就分析工作中常用的色谱柱整理整理与大家分享1、色谱柱是否可以反冲那什么柱子可以反冲什么不可以?反冲后是正着用还是反着用?一般的正相、反相柱应该都能反冲只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲可不可以反冲得看你的柱子两头的孔径是否一致若不一致肯定不行 一般来说低流速反冲是没有任何问题的因为柱子在制备的时候是在40MPa左右条件下进行填充的1.0ml/min的流速的柱压顶多十几MPa怎么可能对柱床造成明显的影响呢 有人说：反冲可能使键合相碳链一边倒与原来的方向相反会影响柱子的分离效果 众所周知只有碳链在完全自由舒展的条件下柱效是最好的照上面的说法反冲不刚好把碳链恢复到自由舒展的状态这样不更好吗 其实实验早已证明：在至少5%的有机相中碳链是可以完全自由舒展的正冲则可能污染整个柱子反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉反冲后还是正着用比较好以免柱子的两头都被污染2、对于一根常用的c18 柱拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护?为什么要这样做?新柱活化实际上是一个平衡的过程除了用流动相平衡外有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡特别是测定分子量比较高的多肽尤其重要因为分子量高的物质分子扩散速度慢平衡所需时间也相应较长具体平衡方式也很简单多进几次样品直到峰面积和保留时间稳定再进行正式进样测定如果要加快平衡时间把前面用来平衡的进样样品浓度加大或者不等洗脱完成连续进样多针用待测物对新柱平衡目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉3、如果柱子取下来放置一段时间需要做什么保护吗?对一般的反相柱也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中然后用堵头塞紧柱两头以免保存溶剂挥发应该不需要做特殊的保护4、多个样品不好不离的时候请问该怎么通过选择合适的柱子来提高分离度?提高分离度可从三个主要影响因素来考虑柱效、选择性和保留因子可通过减小填料粒径和增加柱长提高柱效;选择性和固定相选择以及pH 条件有关通过选择合适的色谱柱和合适的pH可以提高选择性;有时候适当延长出峰时间增加保留因子也可提高分离度5、因为不知道流动相已走完液相色谱柱空走了大概一晚上请问这种情况下柱子还能用吗?如果可以应该如何再生?能用的可能柱子里会有气泡进去但之后多用流动相冲冲看到基线稳定就没问题了用色谱柱的保存液低流速长时间冲洗然后再检测一下柱效看柱子是否恢复液相最好设置一下最低压限这样就不怕流动相走光而会损伤色谱柱
2025-05-14 15:33:59
